Результаты секвенирования гена UGT1A1 у лиц с фенотипом синдрома Жильбера

Abstract

Цель. Оценка эффективности прямого автоматического секвенирования гена UGT1A1 для поиска мутаций у пациентов с фенотипом синдрома Жильбера. Материалы и методы. Проведено прямое автоматическое секвенирование по Сэнгеру экзонов и части промотора гена UGT1А1 для 24 человек с непрямой гипербилирубинемией, у которых были исключены все другие ее причины, кроме генетических, и сделан ДНК-анализ на определение количества ТА-повторов в промоторе гена UGT1А1 (rs3064744). Распределение генотипов rs3064744 в группе: пять человек - генотип 7ТА/7ТА, пять человек - генотип 6ТА/6ТА, 12 человек - генотип 6ТА/7ТА, один человек - генотип 5ТА/7ТА, один человек - генотип 6ТА/8ТА. ДНК выделена методом фенолхлороформной экстракции или экспресс-методами. Секвенирование выполнено методом капиллярного электрофореза на аппарате Hitachi 3500 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, США). Результаты. Идентифицированы однонуклеотидные варианты неопределенной клинической значимости rs3755319 (у 21 человека) и rs28899472 (у трех человек с генотипом 7ТА/7ТА rs3064744) в промоторе гена UGT1A1, rs2125984650 в 1-м экзоне гена UGT1A1 (у одного человека с генотипом 5ТА/7ТА rs3064744). У двух лиц с генотипами 6ТА/7ТА rs3064744 выявлены варианты гена, которые являются патогенными и вероятно патогенными для синдрома Жильбера по данным некоторых источников (rs4148323, rs1273237448). Заключение. Прямое автоматическое секвенирование по Сэнгеру гена UGT1A1 может быть следующим этапом ДНК-анализа после определения генотипа rs3064744 для лиц с генотипами 6ТА/6ТА, 6ТА/7ТА rs3064744 и подозрением на синдром Жильбера.Aim. To evaluate the effectiveness of automated Sanger sequencing of the UGT1A1 gene to search for pathogenic mutations in individuals with the Gilbert syndrome phenotype. Materials and methods. Automated Sanger sequencing of exons and part of the promoter in the UGT1A1 gene was carried out for 24 people with unconjugated hyperbilirubinemia, in whom all other causes except for genetic ones were excluded and DNA analysis was performed to determine the number of TA repeats in the promoter of the UGT1A1 gene (rs3064744). Distribution of rs3064744 genotypes in the group was the following: 5 people - 7TA/7TA genotype, 5 people - 6TA/6TA genotype, 12 people - 6TA/7TA genotype, 1 person - 5TA/7TA genotype, 1 person - 6TA/8TA genotype. DNA was isolated using phenol - chloroform extraction or express methods. The sequencing was performed by capillary electrophoresis on the Hitachi 3500 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, USA). Results. Single nucleotide variants of uncertain significance were identified: rs3755319 (in 21 people) and rs28899472 (in three people with the 7TA/7TA genotype of rs3064744) in the promoter of the UGT1A1 gene, rs2125984650 in the first exon of the UGT1A1 gene (in one person with the 5TA/7TA genotype of rs3064744). In two individuals with the 6TA/7TA genotype of rs3064744, gene variants were identified that were pathogenic or likely pathogenic for the Gilbert syndrome according to some sources (rs4148323, rs1273237448). Conclusion. According to the results of the study, automated Sanger sequencing of the UGT1A1 gene may be the next stage of DNA analysis after determining the rs3064744 genotype for individuals with 6TA/6TA, 6TA/7TA rs3064744 genotypes and suspected Gilbert syndrome.